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考考你,ELISA基础问题你都了解吗?
发布时间:2019-07-09 阅读:70
Elisa是检测蛋白zui常用的方法之一,关于这个实验,你真的了解吗?小编在这里精选了有关试剂盒的几个基础问题,考一考大家。
一、实验操作步骤中加入的检测稀释液
会不会使样本浓度变稀?
因为检测稀释液是加到所有样品孔中的,标准品和样本是同等处理的。所以,可以直接从标准曲线中读到样本的分析物浓度,不需针对这个稀释步骤进行调整。
二、校准稀释液的量够我准备所有的样本么?
设计试剂盒时,考虑到绝大多数样本的浓度是落在指定检测范围内,提供的校准稀释液是足够的。万一您发现试剂盒带的稀释液不够用时有至少两个方法解决:
1、 对样品进行两步稀释。先在培养基中稀释,然后在试剂盒带的校准稀释液中以1:10以上的比例做zui终稀释。
2、如果库存还有与您试剂盒同批次的稀释液,若您想购买, 会象征性收取费用。
三、试剂盒可以检测哪些样本?
典型的(试剂盒对血清、两类血浆以及细胞培养上清做了验证。但要注意的是,不同产品之间都可能存在差别。产品说明书和产品的官网专页记录了用该试剂盒验证过的所有样本类型。只提供对这些声明了的样本类型的售后支持。在官网产品页引用文献标签下可以看到有些文献引用的是将该试剂盒用于另外一些样本类型。这些未声明样本类型需要客户自行验证。
四、可以检测组织匀浆液或其他一些未验证过的
样本类型吗?
非常遗憾,组织匀浆液并不是ELISA试剂盒常规验证样本类型。但这并不意味着其不能用于这些未验证样本的检测。使用者需先做掺入回收实验来验证其是否可用。首先,需要将待检测样本分为两份。在其中一份中掺入一定量的标准品。将掺入标准品的样本和未掺入的样本均做梯度稀释。一般而言,样本的回收率在80-120%的是可接受的。此方法可用于验证任何未经公司验证的样本类型。
五、为什么我的样本什么都没检测出来?
本试剂盒对样本进行定量的下限是标准曲线的zui低浓度值。在一些情况下,标准曲线下端足够低,可以检测正常人样本。您可以查阅试剂盒说明书的部分,找到我们从健康人样本中获得的样本值情况。您也可以查阅文献看对于您的靶点是否有现成的正常浓度范围信息。在进行数据比较时需要注意检测平台和生产厂家不同,会造成他们的检测产品和测量值记录不能直接关联。
六、试剂盒里都有哪些物品?
试剂盒是完整的即用型试剂盒,包括:预包被96孔板,带标记的检测抗体,经校正的蛋白标准品,检测稀释液,校准稀释液,洗涤液,显色剂A和B,终止液,封板膜。它们是对说明书中所列的样本类型进行了充分验证的ELISA试剂盒。为取得优越品质,对它们进行了不遗余力的全面测试。
七、一个试剂盒
可以检测多少个样本?
大多数试剂盒是检测标准曲线和40个双份样本。对于每个试剂盒,详情请参考说明书。
八、我是否可将标准曲线的两端延伸?
在任何情况下,我们都不支持超出确定范围的实验结果。在我们确定的测试范围,我们保证实验结果的可重复性。
九、为什么不将测试范围延伸到所述的灵敏度?
灵敏度是统计中大于零的可测到的zui低值。它是通过本底信号和试验的可变性计算出来的。灵敏度通常是将从20个零值标准复孔的平均OD值加两个标准差并依据标准曲线得到的分析物浓度。而zui低标准是仍可与标准曲线成直线相关的zui低点,因而是可定量的,但其定量可靠性低于落在标准曲线范围的定量。
十、我手里的稀释液看起来含有沉淀,怎么办?
由于缓冲液的某些组分溶解饱合度的原因,一些RD检测稀释液可能含有轻度到重度的沉淀。如果遇到这种情况,说明书中会有特殊的操作说明。
十一、检测操作步骤强调要用500rpm的摇床,
我的摇床达不到那么快,是不是弄错了?
对摇床的要求是500rpm,轨道直径3mm。如果平面摇床有更大的轨道直径,500rpm就太快了。我们推荐微量滴定平板摇床。对于需要摇床解育的试剂盒,它们的优化是针对上述参数进行的。
十二、为什么在有些试剂盒中要求进行样本稀释?
进行稀释主要有两个原因。第一个是一些检测中大部分样本的读值会高于标准曲线,因此需要稀释将分析物水平降到检测的范围内。第二个是稀释可以限制复杂基质中的干扰成分的影响。











                                                                                                                                              (本文内容来源于网络,如有侵权请联系删除)

 
 

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